技術文章
各位科研伙伴,類器官培養試劑選擇記住三個黃金法則,2 分鐘掌握關鍵 ——
一、基質膠:搭好三維 “腳手架"
天然基質(如 Matrigel)像真實細胞外基質,選它看兩點:
? 硬度適配:腸類器官用軟基質(濃度 1.2-2.4 mg/mL),肝類器官用中等硬度,別搞錯!
? 批間穩定:必須選低內毒素(<5 EU/mL)、無支原體的批次,到手先測成球率,1000 個細胞 72 小時成球>80% 才合格。
合成基質(如 PEG 水凝膠)成分純、無動物源,適合培養或研究基質單獨作用。
二,培養基:配好營養 “信號餐"
基礎培養基按器官選:腸胃用 MEM/NEAA,肝腎用 DMEM/F12,都要無酚紅、低糖版。
關鍵生長因子是靈魂:
? 腸肺類器官離不開 Wnt 激動劑(R-spondin 1+Noggin),純度>95% 才有效;
? 分化期加對應因子,比如腎類器官加 BMP-7,胰腺類器官抑制 TGF-β,濃度隨階段調。
傳代時加 Y-27632,24 小時內提高貼壁存活率,新手可用!
三,質量控制:避開試劑 “雷區"
? 安全性:內毒素<1 EU/mL(高了類器官會發炎),無菌檢測做 14 天,支原體用 MycoAlert 快篩;
? 功能性:成球率>80%,還要有典型結構(比如腸類器官長隱窩),測基因確保沒 “長歪";
? 批間穩定:同一批試劑傳 10 代以上,別讓類器官越養越差。